Hogyan határozzuk meg az optimális koncentrációt?
Az induktor IPTG (izopropil-béta-d-tiogalaktozid) esetében minél magasabb a koncentráció, annál jobb.Az optimális koncentráció a konkrét kísérleti körülményektől és a kívánt indukciós hatástól függ.
Általában az IPTG koncentrációját 0,1-1 mM tartományban alkalmazzuk.Alacsonyabb koncentrációk csökkenthetik a sejtnövekedésre gyakorolt káros hatásokat, és csökkenthetik a citotoxicitást a célfehérjék túlzott expressziója miatt.A magasabb koncentrációk túlzott sejtmetabolikus terhelést okozhatnak, ami befolyásolja a sejtnövekedést és az expressziós hatékonyságot.
Az optimális koncentráció meghatározásának módja lehet a célfehérje expressziós szintjének értékelése IPTG indukciós tesztek elvégzésével különböző koncentrációkban.Kis léptékű tenyésztési tesztek végezhetők különböző IPTG-koncentrációk (pl. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM stb.) alkalmazásával, és az expressziós hatás különböző koncentrációknál a célfehérje (pl. Western) expressziós szintjének kimutatásával értékelhető. blot vagy fluoreszcencia kimutatás).A kísérleti eredmények alapján a legjobb expressziós hatású koncentrációt választottuk optimális koncentrációnak.
Ezenkívül a vonatkozó szakirodalomra vagy más laboratóriumok tapasztalataira is hivatkozhat, hogy megértse a hasonló kísérleti körülmények között általánosan használt IPTG koncentrációtartományt, majd optimalizálja és módosítsa a kísérleti igényeknek megfelelően.
Fontos megjegyezni, hogy az optimális koncentráció a különböző expressziós rendszerektől, célfehérjéktől és kísérleti körülményektől függően változhat, ezért a legjobb, ha eseti alapon optimalizáljuk.
Feladás időpontja: 2023.09.28