4-Nitro-fenil-béta-D-galaktopiranozid CAS:200422-18-0

Hatás: Az ONPG egy szubsztrát, amelyet kifejezetten a β-galaktozidáz enzim jelenlétének és aktivitásának kimutatására használnak.Ha a β-galaktozidáz enzim jelen van és aktív, az ONPG-t két termékre hasítja: o-nitrofenolra és galaktóz származékra.Az o-nitrofenol felszabadulása sárga színváltozást eredményez, amely spektrofotométerrel mérhető.

Alkalmazás: Az ONPG-nek számos alkalmazása van a molekuláris biológiai és biokémiai kutatásokban:

A β-galaktozidáz aktivitás meghatározása: Az ONPG-t általában a β-galaktozidáz enzim aktivitásának mérésére és számszerűsítésére használják.Az enzimaktivitással egyenesen arányos o-nitrofenol képződés sebessége spektrofotometriásan mérhető.

Génexpresszió és szabályozás: Az ONPG-t gyakran használják a génexpressziós és szabályozási vizsgálatokhoz kapcsolódó kísérletekben.Gyakran használják fúziós fehérje vizsgálatokban, mint például az általánosan használt lacZ fúziós rendszerben, hogy tanulmányozzák a gének expresszióját specifikus promóterek szabályozása alatt.Az ONPG segítségével mért béta-galaktozidáz aktivitás betekintést nyújt a génexpresszió szintjébe.

A β-galaktozidáz aktivitás szűrése: Az ONPG kolorimetriás szűrési módszerként használható a rekombináns DNS technológiában a β-galaktozidázt kódoló LacZ gén jelenlétének és funkcionalitásának azonosítására.Ez a szűrési módszer segít a kérdéses gént tartalmazó klónok azonosításában.

Enzimkinetikai vizsgálatok: Az ONPG a β-galaktozidáz enzim kinetikájának tanulmányozásában is hasznos.Az enzim-szubsztrát reakció sebességének mérésével különböző szubsztrátkoncentrációknál kinetikai paraméterek, például Michaelis-Menten állandók (Km) és maximális reakciósebességek (Vmax) meghatározhatók.