4-Nitrofenil-béta-D-galaktopiranozid CAS: 200422-18-0

Hatás: Az ONPG egy szubsztrát, amelyet kifejezetten a β-galaktozidáz enzim jelenlétének és aktivitásának kimutatására használnak. Amikor a β-galaktozidáz enzim jelen van és aktív, az ONPG-t két termékké bontja: o-nitrofenolra és egy galaktóz származékra. Az o-nitrofenol felszabadulása sárga színváltozást eredményez, amely spektrofotométerrel mérhető.

Alkalmazás: Az ONPG számos alkalmazással rendelkezik a molekuláris biológia és a biokémia kutatásában:

β-galaktozidáz aktivitás meghatározása: Az ONPG-t általában a β-galaktozidáz enzim aktivitásának mérésére és mennyiségi meghatározására használják. Az o-nitrofenol képződésének sebessége, amely egyenesen arányos az enzimaktivitással, spektrofotometriásan mérhető.

Génexpresszió és -szabályozás: Az ONPG-t gyakran alkalmazzák a génexpresszióval és -szabályozással kapcsolatos kísérletekben. Gyakran alkalmazzák fúziós fehérje vizsgálatokban, például a gyakran használt lacZ fúziós rendszerben, specifikus promóterek szabályozása alatt álló gének expressziójának vizsgálatára. Az ONPG segítségével mért béta-galaktozidáz aktivitás betekintést nyújt a génexpresszió szintjébe.

β-galaktozidáz aktivitás szűrése: Az ONPG kolorimetriás szűrőmódszerként használható a rekombináns DNS-technológiában a β-galaktozidázt kódoló LacZ gén jelenlétének és működésének azonosítására. Ez a szűrőmódszer segít azonosítani azokat a klónokat, amelyek tartalmazzák a kérdéses gént.

Enzimkinetikai vizsgálatok: Az ONPG hasznos a β-galaktozidáz enzim kinetikájának vizsgálatában is. Az enzim-szubsztrát reakció sebességének mérésével különböző szubsztrátkoncentrációk mellett meghatározhatók olyan kinetikai paraméterek, mint a Michaelis-Menten állandók (Km) és a maximális reakciósebességek (Vmax).