A ditiotreitol (DTT) egy általánosan használt redukálószer, más néven új zöld adalék.Ez egy kis molekulájú szerves vegyület, két merkaptáncsoporttal (-SH).Redukáló tulajdonságai és stabilitása miatt a DTT-t széles körben használják biokémiai és molekuláris biológiai kísérletekben.
A DTT fő szerepe a diszulfidkötések csökkentése a fehérjékben és más biomolekulákban.A diszulfidkötés fontos része a fehérje feltekeredésének és stabilitásának, de bizonyos kísérleti körülmények között, mint például redukálható SDS-PAGE analízis, fehérje rekombináció és hajtogatás, szükséges a diszulfidkötés redukálása két tiolcsoportra, hogy feltárjuk a fehérje térszerkezetét. a fehérjét.A DTT reakcióba léphet a diszulfid kötésekkel, hogy azokat merkaptáncsoportokká redukálja, ezáltal megnyílik a fehérje térszerkezete, és megkönnyíti az elemzést és a manipulációt.
A DTT az enzimaktivitás és -stabilitás védelmére is használható.Néhány enzim által katalizált reakcióban az enzim aktivitását az oxidálószer csökkentheti.A DTT reakcióba léphet az oxidáló szerekkel, hogy azokat ártalmatlan anyagokká redukálja, ezáltal megvédje az enzim aktivitását és stabilitását.
A hagyományos redukálószerekhez, például a β-merkaptoetanolhoz (β-ME) képest a DTT biztonságosabb és stabilabb redukálószernek tekinthető.Nemcsak vizes oldatban stabil, hanem magas hőmérsékleten és sav-bázis körülmények között is megtartja redukáló tulajdonságait.
A DTT használata viszonylag egyszerű.Általában a DTT-t megfelelő pufferben feloldjuk, majd hozzáadjuk a kísérleti rendszerhez.A DTT optimális koncentrációját az adott kísérletnek megfelelően kell meghatározni, és általában 0,1-1 mM tartományban használják.Alacsonyabb koncentrációk csökkenthetik a sejtnövekedésre gyakorolt káros hatásokat, és csökkenthetik a citotoxicitást a célfehérjék túlzott expressziója miatt.A magasabb koncentrációk túlzott sejtmetabolikus terhelést okozhatnak, ami befolyásolja a sejtnövekedést és az expressziós hatékonyságot.
Az optimális koncentráció meghatározásának módja lehet a célfehérje expressziós szintjének értékelése IPTG indukciós tesztek elvégzésével különböző koncentrációkban.Kis léptékű tenyésztési tesztek végezhetők különböző IPTG-koncentrációk (pl. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM stb.) alkalmazásával, és az expressziós hatás különböző koncentrációknál a célfehérje (pl. Western) expressziós szintjének kimutatásával értékelhető. blot vagy fluoreszcencia kimutatás).A kísérleti eredmények alapján a legjobb expressziós hatású koncentrációt választottuk optimális koncentrációnak.
Ezenkívül a vonatkozó szakirodalomra vagy más laboratóriumok tapasztalataira is hivatkozhat, hogy megértse a hasonló kísérleti körülmények között általánosan használt IPTG koncentrációtartományt, majd optimalizálja és módosítsa a kísérleti igényeknek megfelelően.
Fontos megjegyezni, hogy az optimális koncentráció a különböző expressziós rendszerektől, célfehérjéktől és kísérleti körülményektől függően változhat, ezért a legjobb, ha eseti alapon optimalizáljuk.
Összefoglalva, a DTT egy általánosan használt redukálószer, amely felhasználható a fehérjékben és más biomolekulákban lévő diszulfidkötések csökkentésére, valamint az enzimaktivitás és -stabilitás védelmére.Széles körben alkalmazták biokémiai és molekuláris biológiai kísérletekben.
Feladás időpontja: 2023.09.28