Fenilgalaktozid CAS: 2818-58-8

Az enzimaktivitásra gyakorolt ​​hatás: A fenilgalaktozidot általában a β-galaktozidáz enzim aktivitásának mérésére használják. Amikor a fenilgalaktozidot a β-galaktozidáz hidrolizál, p-nitrofenol szabadul fel. A p-nitrofenol felhalmozódása kvantitatívan mérhető, ami betekintést nyújt a β-galaktozidáz aktivitásába. Ezt a hatást olyan alkalmazásokban hasznosítják, mint az enzimvizsgálatok és a szűrőrendszerek.

Génexpressziós analízis: A fenilgalaktozidot gyakran használják szubsztrátként a molekuláris biológiai kísérletekben a génexpresszió vizsgálatára. A β-galaktozidázt kódoló lacZ gént gyakran más, érdekes gének szabályozó szekvenciáival fuzionálják. A lacZ gén expressziója és a fenilgalaktozid β-galaktozidáz általi hidrolízise jelezheti a vizsgált célgén expressziós mintázatát és szintjét.

Szűrőrendszerek: A fenilgalaktozid fontos alkotóeleme a β-galaktozidáz aktivitást kihasználó szűrőrendszereknek. Egy széles körben ismert példa erre a kék-fehér szűrőmódszer, amelyet rekombináns vagy transzformált sejtek azonosítására használnak molekuláris biológiai kísérletekben. Azok a telepek, amelyek sikeresen felvették a rekombináns DNS-t vagy genetikai rekombináción estek át, β-galaktozidázt fognak expresszálni, ami a fenilgalaktozid hidrolíziséhez és kék szín kialakulásához vezet.

Fehérjetisztítás: Bizonyos esetekben a fenilgalaktozid ligandumként használható affinitáskromatográfiához olyan fehérjék tisztítására, amelyek specifikusan kötődnek a β-galaktozidázhoz, vagy amelyeket az aktivál. A kérdéses fehérje tartalmazhat egy affinitási jelölést vagy egy fúziós jelölést, amely egy β-galaktozidáz-kötő domént tartalmaz. A fehérjekeveréket egy immobilizált fenilgalaktozidot tartalmazó oszlopon átengedve a kívánt fehérje szelektíven visszatartható, majd eluálható.